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標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng)要注意些什么？

標(biāo)記細(xì)胞株是細(xì)胞系中特定標(biāo)簽（Luc、GFP、RFP等）的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移，該細(xì)胞系可用作示蹤細(xì)胞，為細(xì)胞成像和體內(nèi)成像提供了很大的便利。標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng)：1、在無菌條件下，取出1-3DSD大鼠的心房組織，然后用PBS清洗組織塊兩次，然后將組織切成1mm3左右；2、在組織塊中加入4ml酶消化液（0.1%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型膠原酶），懸停10s，37℃消化10min，然后用滴定管吹成單細(xì)胞懸液，自然沉淀收集取上清，用10%fbs培養(yǎng)基消化終止后置于4℃；3、剩余組織加入3～4m...

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)基于形態(tài)學(xué)的方法要怎么操作？

凋亡或者說程序性細(xì)胞死亡，是細(xì)胞內(nèi)建的防御機(jī)制之一，在生物的正常發(fā)育及疾病抵御中起到重要的作用。凋亡過程與通路的異常，會(huì)導(dǎo)致多種疾病，包括腫瘤。目前至少有十?dāng)?shù)種檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法，從大框架上講，可以劃分為基于細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標(biāo)記三大類。那么細(xì)胞凋亡檢測(cè)基于形態(tài)學(xué)的方法是怎么操作的呢？1、電子顯微鏡檢查“凋亡”是一個(gè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)概念。因此，鑒定凋亡的金指標(biāo)，往往是基于形態(tài)學(xué)的。凋亡和另外一種主要的細(xì)胞死亡類型“壞死”有著顯著的亞細(xì)胞形態(tài)差異。簡(jiǎn)而言之，在透射電鏡下，凋亡...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題和解答

在制藥行業(yè)，細(xì)胞培養(yǎng)已成為抗體生產(chǎn)的重要組成部分。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已被用于生產(chǎn)針對(duì)輪狀病毒、脊髓灰質(zhì)炎、天花、肝炎、風(fēng)疹和水痘的抗體?；诩?xì)胞的流感抗體也已獲準(zhǔn)在美國(guó)和許多歐洲國(guó)家使用。那么細(xì)胞培養(yǎng)的前景如何？3D細(xì)胞培養(yǎng)出于多種原因，對(duì)2D細(xì)胞培養(yǎng)的需求正在增加。2D細(xì)胞培養(yǎng)方法包括在平面上將細(xì)胞培養(yǎng)成2D單層。二維貼壁細(xì)胞培養(yǎng)從根本上限制了細(xì)胞的產(chǎn)生。研究人員提出了3D細(xì)胞培養(yǎng)來解決這些問題。這些培養(yǎng)物已被證明在一些基本生物學(xué)機(jī)制的研究中是有效的，例如細(xì)胞數(shù)量監(jiān)測(cè)、細(xì)胞活力、...

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)的常用檢測(cè)方法有這幾種

要了解細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法，首先要了解細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，形態(tài)學(xué)觀察表明細(xì)胞凋亡的變化是多階段的。細(xì)胞凋亡往往涉及多個(gè)細(xì)胞，甚至少數(shù)細(xì)胞也異步發(fā)生。首先細(xì)胞體積縮小，連接消失，與周圍細(xì)胞分離，然后細(xì)胞質(zhì)密度增加，隨后會(huì)發(fā)生一系列變化：線粒體膜電位消失；滲透率變化；將細(xì)胞c釋放到細(xì)胞質(zhì)中；核質(zhì)濃度、核膜和核仁碎裂；DNA被降解成180bp-200bp左右的片段，在細(xì)胞膜內(nèi)形成囊泡；絲氨酸膜表面轉(zhuǎn)向磷脂膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完好無損?？梢詫⒌蛲黾?xì)胞的殘骸分割包裹成若干個(gè)凋亡小體而不...

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3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)具有哪些實(shí)際意義？

作為生命科學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)長(zhǎng)期技術(shù)，二維細(xì)胞培養(yǎng)使人類能夠在體外研究細(xì)胞的生理和病理。然而，隨著對(duì)細(xì)胞微環(huán)境概念的逐漸了解，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)二維培養(yǎng)細(xì)胞的生理狀態(tài)和活性與體內(nèi)細(xì)胞并不*一致，結(jié)果往往與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床結(jié)果不一致。實(shí)驗(yàn)。因此，在過去的十年里，科學(xué)家們一直致力于開發(fā)各種3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，為細(xì)胞提供更類似于體內(nèi)環(huán)境的培養(yǎng)環(huán)境。研究人員逐漸意識(shí)到，為了在體外實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能，3D細(xì)胞培養(yǎng)需要能夠模擬體內(nèi)環(huán)境的關(guān)鍵特征，包括細(xì)胞、細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用，以及細(xì)...

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對(duì)于耐藥細(xì)胞株的培養(yǎng)方法你了解多少？

耐藥細(xì)胞株在長(zhǎng)期保存和傳代過程中受到各種不穩(wěn)定因素的影響，例如，細(xì)胞遺傳污染和基因變異。因此，經(jīng)過一段時(shí)間后，細(xì)胞的遺傳物質(zhì)可能發(fā)生變化，導(dǎo)致其生物學(xué)特性發(fā)生變化，從而降低動(dòng)物模型的一致性和可比性。因此，為了保證動(dòng)物模型的穩(wěn)定性，必須對(duì)細(xì)胞株的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。那么你對(duì)它的培養(yǎng)方法了解多少？所有轉(zhuǎn)染腫瘤和病毒的細(xì)胞都被認(rèn)為具有潛在的生物危害，必須在二級(jí)生物安全平臺(tái)上操作，請(qǐng)注意防護(hù)。所有與該單元接觸的廢液和容器只能在高壓滅菌后丟棄。收到耐藥細(xì)胞株后，用倒置透鏡觀察整個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情...

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什么原因會(huì)導(dǎo)致胎牛血清FBS沉淀？

胎牛血清FBS是一種性能強(qiáng)的血清產(chǎn)品，適用于精細(xì)細(xì)胞系的培養(yǎng)，使用3次0.1μM過濾方法和40多項(xiàng)質(zhì)量控制測(cè)試。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，該產(chǎn)品可用于腫瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、雜交瘤、內(nèi)皮細(xì)胞等。經(jīng)過多道分離純化過濾工藝，質(zhì)地純凈，內(nèi)毒素等免疫原性蛋白含量極低，適用于各種細(xì)胞的取樣培養(yǎng)，尤其是干細(xì)胞、原代細(xì)胞和其他血清依賴性高的細(xì)胞（如胚胎干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞），以及其他高要求的實(shí)驗(yàn)研究對(duì)于血清質(zhì)量。胎牛血清FBS解凍要求：1、請(qǐng)?jiān)?℃～8℃的環(huán)境中解凍，不宜在較高溫度解凍...

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什么是充質(zhì)干細(xì)胞？它的實(shí)驗(yàn)步驟又是怎樣的？

充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞的一個(gè)研究分支，干細(xì)胞是一種具有自我復(fù)制和多向分化能力的細(xì)胞。它們可以不斷自我更新，在特定條件下轉(zhuǎn)化為一個(gè)或多個(gè)構(gòu)成人體組織或器官的細(xì)胞。干細(xì)胞是人體的起源細(xì)胞，是構(gòu)成人體各種組織器官的祖細(xì)胞。充質(zhì)干細(xì)胞是一種存在于多種組織（如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等）中的成體干細(xì)胞，具有多向分化潛能，是非造血干細(xì)胞。這種干細(xì)胞可以分化成多種間充質(zhì)細(xì)胞（如成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等）或非間充質(zhì)細(xì)胞，具有分化潛能，具有*的細(xì)胞因子分泌功能。細(xì)胞模型已...

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