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原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)是為了什么？

原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的嘗試，我們實(shí)驗(yàn)室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經(jīng)驗(yàn)?？偨Y(jié)如下：1、細(xì)胞分散和接種均勻度分離出來(lái)的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊，因此，在差動(dòng)貼壁前后，應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后，用滴管輕輕吹每個(gè)孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。2、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類型的選擇成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間...

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細(xì)胞培養(yǎng)基給了體外細(xì)胞“一個(gè)家”

細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境，維持細(xì)胞體外存活和增殖的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)。它的主要功能是為細(xì)胞提供合適的pH值和滲透壓，以及細(xì)胞自身不能合成的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基系列產(chǎn)品包括旨在支持和維持細(xì)胞系生長(zhǎng)的產(chǎn)品，適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)胞系，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的測(cè)試和驗(yàn)證。我們開發(fā)的即用型培養(yǎng)基產(chǎn)品包括粉末和濃縮物，可以滿足您的實(shí)驗(yàn)設(shè)施和預(yù)算的雙重需求。培養(yǎng)基中特別添加了能有效改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的營(yíng)養(yǎng)成分和針對(duì)不同物種特選的優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，適用于各種干細(xì)胞的體外培養(yǎng)。1、預(yù)先加入穩(wěn)定形態(tài)...

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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中螢火蟲熒光素F-Luciferase和海腎熒光素R-Luciferase具有代表性。研究者利用熒光素酶開發(fā)出一套極其靈敏且使用方便的基因報(bào)告系統(tǒng)。目前，雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區(qū)別：1.物種來(lái)源不同；2.它們的底物和輔因子不同；3.發(fā)光的顏色不同。螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，從甲蟲（Photinuspyralis）中分離得到，大小為61KDa。在...

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原代心肌細(xì)胞研究要注意些什么？

作為主要的研究模型，原代心肌細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于心血管研究。那么我們?cè)谘芯窟^(guò)程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細(xì)胞在出生后3天內(nèi)具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時(shí)間越短，離體心肌細(xì)胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細(xì)胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因?yàn)殡y以獲得密度均勻的細(xì)胞和控制成纖...

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一文帶你全面了解細(xì)胞因子

一文帶你全面了解細(xì)胞因子一、細(xì)胞因子的概念細(xì)胞因子（cytokine，CK），是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)（多肽或糖蛋白）。細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)歷史1957年，發(fā)現(xiàn)干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細(xì)胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（Tumo...

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RNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

RNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術(shù)。該技術(shù)是用生物素標(biāo)記體外轉(zhuǎn)錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結(jié)合的蛋白復(fù)合體，洗脫得到RNA結(jié)合蛋白質(zhì)。再通過(guò)westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白是否與靶RNA結(jié)合；或通過(guò)質(zhì)譜儀檢測(cè)可以篩選出與靶RNA結(jié)合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此...

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DNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

DNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上，再與細(xì)胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Westernblot檢測(cè)特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎...

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GST pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

GSTPulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標(biāo)簽（如：GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽）進(jìn)行融合表達(dá)，而帶標(biāo)簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標(biāo)簽的固相親和配基捕獲，形成"次級(jí)親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗(yàn)證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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