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SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時后可見...

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新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法

一.實驗方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進(jìn)行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復(fù)使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？

研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對藥物治療的反應(yīng)差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細(xì)胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長特性的細(xì)胞，適用于藥敏試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡...

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充質(zhì)干細(xì)胞涉及的研究竟然這么多

充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中，胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性，是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細(xì)胞相比，成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險低、無倫理爭議等優(yōu)點。因此，成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來源于中胚層的成體干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動時注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動而脫落。（3）細(xì)胞向外遷移時，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。（4）為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞（1）原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時，...

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充質(zhì)干細(xì)胞的醫(yī)療價值真的很高

充質(zhì)干細(xì)胞是一種早期未分化細(xì)胞，具有自我更新、自我復(fù)制、無限增殖和多向分化潛能等特點。它們可以分泌細(xì)胞因子，減輕炎癥，減少組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)內(nèi)源性組織器官干祖細(xì)胞的增殖，進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，從而達(dá)到作為種子細(xì)胞修復(fù)組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學(xué)界稱為“萬能細(xì)胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質(zhì)干細(xì)胞實際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細(xì)胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂...

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腸道腫瘤類器官的研究與應(yīng)用

ONCOGENESIS|腸道腫瘤類器官的應(yīng)用研究類器官（Organoids）類器官是一項創(chuàng)新性較高的研究技術(shù)，近幾年來受到科研人士的追捧和廣泛好評。目前，我們國家在政策層面也給予了大力地支持。2021年科技部發(fā)布的“十四五”國家重點研發(fā)計劃“干細(xì)胞研究與器官修復(fù)”重點專項中也特別提到疾病類器官模型。什么是類器官（Organoids）？類器官屬于三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)物，包含其代表器官的一些關(guān)鍵特性。類體外培養(yǎng)系統(tǒng)包括一個自我更新干細(xì)胞群，可分化為多個器官特異性的細(xì)胞類型，與對應(yīng)...

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細(xì)胞污染的辨別

細(xì)胞污染的辨別細(xì)胞污染有很多種不同的類型，不同情況的細(xì)胞污染其表現(xiàn)也不同，檢測方法也有所不同。不過大部分的細(xì)胞污染，用肉眼加鏡檢就可以解決啦！細(xì)胞污染一般分細(xì)菌污染，真菌污染，支原體污染，黑膠蟲等。1.細(xì)菌污染pH升高，培養(yǎng)基變黃，培養(yǎng)基嚴(yán)重渾濁，鏡下可見細(xì)菌游動。2.真菌污染培養(yǎng)液短期內(nèi)多不渾濁，有肉眼可見漂浮物，鏡下細(xì)胞間有菌絲體，生長變慢，時間長細(xì)胞死亡。3.支原體污染支原體污染后，細(xì)胞生長一般無可見變化，在光學(xué)顯微鏡下不可見，極易被忽視，往往直到污染非常嚴(yán)重時才能發(fā)現(xiàn)...

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